Rūpnieciskā hromatogrāfijas kolonna

Tādsiaugstu audzischromatogrāfijacfondsir rīks, ko izmanto ķīmiskai analīzei, kas atdala savienojumus maisījumā un mēra katra savienojuma daudzumu ., to plaši izmanto naftas ķīmijas, farmaceitiskās, pārtikas rūpniecības, vides aizsardzības un citos laukos atdalīšanai, attīrīšanai un noteikšanai . {2. consists of a stationary phase and a mobile phase. In chromatographic analysis, the sample is passed through a column, where the characteristics of the fixed phase and the mobile phase allow various compounds to pass through the column at different rates, thus achieving separation. These compounds can then be detected and quantitatively analyzed by a detector.

Kolonnas atdalīšanas efekts ir atkarīgs no izvēlētās stacionārās fāzes, kā arī no kolonnas . sagatavošanas un darbības apstākļiem izplatīšanas kolonnās ietilpst oglekļa oktāna kolonna (ODS/C18), oglekļa oktāna kolonna (MOS/C8), oglekļa heksil/C6, oglekļa kvartāra kolonna (Butyl/C4), oglekļa metils/C1, anjona apmaiņa (SAX), C4), oglekļa metils/C1, anjona apmaiņa) (SAX), C4), oglekļa metil/C1, anjona apmaiņa) (SAX), C4), C4), oglekļa metil/C1, anjona an -an -an -ana) kolonna (Butyl), C4), oglekļa metil/C1, anjona anionu) kolonna (SAX), C4), C4), ogleklis) (SCX), fenila kolonna (fenilgrupa), aminogrupa (A) MINO/NH2), cyano/cn/nitrils utt. .

Rūpnieciskās hromatogrāfijas kolonnās ir plašs pielietojumu klāsts vairākos laukos, ieskaitot:

Biofarmaceitisks:Hromatogrāfiskā kolonna ir galvenais biofarmaceitiskās atdalīšanas un attīrīšanas līdzeklis, ko izmanto augstas tīrības un augstas aktivitātes bioloģisko produktu ražošanai .
Pārtikas nekaitīgums:Izmanto, lai noteiktu kaitīgas vielas, piemēram, piedevas un atliekas pārtikā, lai nodrošinātu pārtikas nekaitīgumu .
Vides uzraudzība:Piesārņotāju atdalīšana un analīze vidē un vides kvalitātes novērtēšana .
Naftas ķīmijas:Izmanto naftas produktu tīrības noteikšanai, piemaisījumu analīzei utt. .

Daudzās jomās, piemēram, rūpnieciskā analīze, vides uzraudzība, zāļu izpēte un attīstība, hromatogrāfiskā kolonna ir galvenais atdalīšanas rīks, un tā veiktspēja tieši ietekmē analītisko rezultātu . precizitāti un uzticamību . Kolonnas veiktspēja lielā mērā ir atkarīga no tā veida, un tas ir raksturīgs, un tas ir saistīts ar aizpildītājiem, kas ir saistīti ar atlases principiem, un tie ir saistīti ar personu, kas ir saistīta ar personu, kas ir saistīta ar atlases principiem, un tas ir vērsts uz personu, kas ir piesaistīts, un tas ir saistīts ar personu. Kolonnas, lai sniegtu noderīgu atsauci pētniekiem saistītos laukos .

Kolonnu iesaiņojuma veids

Kolonnu pildvielu izvēle ir plaša, un saskaņā ar dažādiem pamatmateriāliem to var iedalīt neorganiskos pildvielās, organiskajos pildvielās un bioloģiskajos pildvielās . Katram pildījumam ir savas unikālās fizikālās un ķīmiskās īpašības un lietojumprogrammas apjoms .}

Neorganiska pildviela

Inorganic fillers are known for their high mechanical stability, high temperature stability and acid-base stability, and are suitable for more demanding separation conditions. Common inorganic fillers include silica gel, alumina, graphitized carbon and zirconia.

Silica gel is one of the most commonly used inorganic fillers, and its surface has polar functional groups such as silicon hydroxyl group (SiOH), which is suitable for normal phase chromatography and reverse phase chromatography. In normal phase chromatography, silica gel is used as stationary phase, and the polar components are washed out of the column Vispirms . apgrieztā fāzes hromatogrāfijā silīcija gēla virsmas savienošanai ir salīdzinoši vāja funkcionālo grupu polaritāte, piemēram, C18, C8 utt. nosacījumi .

Alumina is also a kind of inorganic filler, and its particles are rigid and can be made into a stable chromatographic column bed. Alumina filler is suitable for mobile phase with pH up to 12, but its application range is limited due to its strong action with alkaline compounds.

Grafitizēts ogleklis ir jauna veida neorganiska pildviela, kura virsma ir aiztures pamats bez jebkādām citām virsmas modifikācijām . Grafitizētiem oglekļa pildvielām ir spēcīgāka aiztures spēja nekā ar alkilgļotu silikagelu vai porainu polimēru pildvielu, un tie ir piemēroti, lai atdalītu noteiktu ģeometrisko izomēru .. Jebkurš pH un temperatūra .

Zirconia filler is one of the new inorganic fillers studied in recent years. It is a commercial porous zirconia microsphere column with polymer coating only. Zirconia filler is suitable for pH range 1~14, temperature up to 100℃, has a broad application prospect.

 

Bioloģiskās pildvielas

Organiskie pildvielas galvenokārt ietver polimēru pildvielas, piemēram, polistirēna-divinilbenzolu, polimetilpropionātu un tā, {. šādus pildvielas var izmantot pH diapazonā no 1 līdz 14, un tiem ir spēcīgāka hidrofobitāte . polimēru pildvielas ar lielām porām, kas ir ļoti efektīva. Turklāt organiskajām pildvielām ir laba ķīmiska un termiskā stabilitāte, un tie ir piemēroti plašam atdalīšanas apstākļu diapazonam .

 

Bioloģiskās pildvielas

Bioloģiskie pildvielas galvenokārt ir piemērotas bioloģisko makromolekulu analīzei, piemēram, olbaltumvielām vai nukleīnskābēm . Parastie bioloģiskie pildvielas ietver polisaharīdu atvasinājumus Stacionāras fāzes kolonnā, ciklodextrīna kolonnā un olbaltumvielu čirālajā kolonnā .}}.

Piemērota kolonnu iesaiņojuma izvēle ir atslēga, lai nodrošinātu hromatogrāfijas atdalīšanas efektu ., izvēloties pildvielas, jāņem vērā šādi faktori:

 Atdalīšanas režīms

According to the properties of analytes, the suitable chromatographic separation mode is selected. Common chromatographic separation modes include reversed phase chromatography (RPC), normal phase chromatography (HILIC), ion exchange chromatography (IEC), Affinity chromatography (Affinity) and gel permeation chromatography (GPC). Different separation Modiem ir dažādas prasības pildvielām, piemēram, reversās fāzes hromatogrāfija parasti izvēlas nepolārus pildvielas, pamatojoties uz silīcija gēlu vai polimēru, savukārt normālas fāzes hromatogrāfija izvēlas polāros pildvielas .

 Fiksēta fāze un mobilā fāze

Stacionārās fāzes izvēle ir atkarīga no analītes polaritātes, molekulārā izmēra un struktūras . polārajām vielām, var izvēlēties polāros pildvielas, piemēram, silikagelu un hidrofilās kolonnu pildvielas; Nepolārām vielām var atlasīt nepolārus pildvielas, piemēram, hidrofobiskas kolonnu pildvielas . Tajā pašā laikā, mobilās fāzes polaritātei ir arī jāsaskaņo fiksētais fāze, lai nodrošinātu labu atdalīšanas efektu ., piemēram, parastā fāzes hromatogrāfija, mobilās fāzes polaritāte ir mazāka nekā tā, kas paredzēta stacionārā; Apgrieztā fāzes hromatogrāfijā mobilās fāzes polaritāte ir spēcīgāka .

 Daļiņu izmērs un diafragma

Pildījuma daļiņu lielums tieši ietekmē kolonnas efektivitāti un parauga slodzes ietilpību . smalkgraudainu pildvielas var nodrošināt augstāku kolonnas efektivitāti, bet var izraisīt paaugstinātu pretspiedienu; Rupja graudu iepakojums ir labvēlīgs paraugu ielādēšanai, bet kolonnas efektivitāte ir zema . Tāpēc pildvielu atlasei jāsabalansē atbilstoši faktiskajām atdalīšanas vajadzībām .} Turklāt pildvielas poru lielums, bet arī lielais peļņas apjoms, bet arī selektivitāte. Mazu poru lieluma pildvielas ir noderīgas, lai uzlabotu mazu molekulāro savienojumu aizturi .

 Ķīmiskā stabilitāte

The selected filler should be chemically stable under analytical conditions and not react with the sample or mobile phase. This is the basis to ensure the accuracy and reliability of the chromatographic separation effect. For separation under high temperature, high pressure or strong acid and alkali conditions, it is necessary to select a filler with higher chemical stability.

 Zīmols un izmaksas

Dažādi kolonnu pildvielu zīmoli var atšķirties pēc veiktspējas, bet arī jāņem vērā izmaksu faktori ., izvēloties pildvielas, ir jāapsver visaptveroši laboratorijas nosacījumi un budžets un jāizvēlas rentabli produkti .}

► Monoklonālo antivielu (mAb) attīrīšana biofarmaceitiskos līdzekļos

Izcelšanās

A global biotech company aimed to scale up the purification of a therapeutic monoclonal antibody (mAb) from a 50 L pilot batch to a 1,000 L commercial batch. The challenge was to maintain >99% tīrība, vienlaikus samazinot agregātu veidošanos un saimnieka šūnu olbaltumvielu (HCP) piesārņojumu .

Metodika

Kolonnas dizains:

300 mm iekšējais diametrs (ID) × 500 mm nerūsējošā tērauda kolonna, kas iesaiņota ar Afinitātes sveķiem Afinity (MABSelect Sure, Cypiva) .

Maksimālais darbības spiediens: 3 bārs .

Procesa parametri:

Saistošais buferis: 20 mm nātrija fosfāts, ph 7.4.

Eluācijas buferis: 0,1 m citronskābe, ph 3.0.

Plūsmas ātrums: 150 ml/min (lineārs ātrums: 100 cm/h) .

Automatizācija:

Integrētie vienreiz lietojamie sensori pH, vadītspējai un UV noteikšanai (280 nm) .

Automatizēta tīrīšana vietā (CIP) ar 0 . 5 m NaOH.

Rezultāti

Raža: 85% (1 020 g mAb no 1200 g jēlnaftas padeves) .

Tīrība: 99 . 5% (HPLC analīze).

Apkopots saturs:<1% (size-exclusion chromatography, SEC).

HCP samazinājums: no 50, 000 ppm līdz<5 ppm (ELISA assay).

Galvenie paņēmieni

Mērogojamība: Kolonnas L/D attiecība (garums pret diametru) 1 . 67 nodrošināja konsekventu veiktspēju starp skalām.

Sveķu dzīves cikls: A olbaltumvielu A sveķi izdzīvoja 100 ciklus ar CIP, samazinot vienas partijas izmaksas par 30%.

Automatizācija: reālā laika uzraudzība samazināja manuālu iejaukšanos par 70%, uzlabojot procesa uzticamību .

Praktiskās lietojumprogrammās pēc atbilstošās kolonnas iesaiņošanas izvēles ir jāpievērš uzmanība, lai nodrošinātu hromatogrāfijas atdalīšanas efektu:

 Sertificēts lasiet kolonnas instrukcijas rokasgrāmatu

Pirms jaunas kolonnas izmantošanas jums rūpīgi jāizlasa tās instrukcijas, lai izprastu pildvielas raksturu, lietošanas nosacījumus un apkopes metodes . Tas palīdz nodrošināt kolonnas pareizu izmantošanu un paplašina tā kalpošanas laiku .

 Izmantojiet labi piepildītu kolonnu

Pārliecinieties, ka kolonna ir labi aizpildīta, bez burbuļiem, bez plaisām un citiem defektiem . Tas palīdz nodrošināt hromatogrāfijas atdalīšanas efekta konsekvenci un precizitāti {.

 Samazināt stresa svārstības

Hromatogrāfiskās atdalīšanas procesā jāsamazina spiediena svārstības, lai izvairītos no mehāniskiem un termiskiem šokiem . Tas palīdz aizsargāt kolonnu pildvielas un pagarināt viņu kalpošanas laiku .

 Izmantojiet aizsargājošās kolonnas un filtrus tiešsaistē

Lai aizsargātu kolonnu pildvielas no piesārņojuma un bojājumiem, var izmantot aizsargājošās kolonnas un līnijas filtrus {. Tas palīdz izspiest piemaisījumu daļiņas un stingri saglabātos komponentus paraugā un mobilajā fāzē .

 Bieži mazgājiet kolonnu ar spēcīgu šķīdinātāju

Regulāra kolonnas izskalošana ar spēcīgu šķīdinātāju var noņemt piemaisījumus un piesārņotājus, kas paliek uz pildvielas virsmas, un saglabāt tā labo atdalīšanas veiktspēju .

 Pilnībā filtrējiet paraugu un mobilo fāzi

Pirms parauga un mobilās fāzes ievadīšanas kolonnā tas ir pilnībā jāfiltrē, lai noņemtu piemaisījumu daļiņas . Tas palīdz izvairīties no aizsērēšanas un samazināta atdalīšanas efekta . pildīšanas.

 Kontrolējiet kolonnas temperatūru

Kolonnas lietošanas temperatūrai ir būtiska ietekme uz tās atdalīšanas efektu . Normālos apstākļos kolonnas temperatūrai jābūt mazākai par 40 grādu . kolonnām ar silikagela gēla matricu, mobilās fāzes pH vērtība jāuztur no 3 . 0 un 8.0, lai izvairītos no piepildīšanas bojājuma bojājuma.

Populāri tagi: Rūpnieciskā hromatogrāfijas kolonna, Ķīnas rūpniecības hromatogrāfijas kolonnu ražotāji, piegādātāji, rūpnīca