Parastā kolonnu hromatogrāfija
2.Hromatogrāfiskā kolonna (rotācijas tips)
3.Cromatogrāfiskā kolonna (manuāla)
*** Cenu saraksts visam iepriekš minētajam, uzziniet mūs, lai iegūtu
Apraksts
Tehniskie parametri
Parastā kolonnu hromatogrāfijaIzmanto dažādu vielu sadalījuma koeficientu atšķirības starp stacionāro fāzi un mobilo fāzi vai dažādas fiksēto fāžu aiztures spējas attiecībā pret dažādām vielām, lai panāktu vielu atdalīšanu. Kad maisījums plūst caur hromatogrāfijas kolonnu ar mobilo fāzi, tas mijiedarbosies ar stacionāro fāzi kolonnā (piemēram, izšķīdināšana, adsorbcija utt.). Sakarā ar atšķirībām katra komponenta fizikālajās un ķīmiskajās īpašībās un struktūrās maisījumā, to mijiedarbības lielums un izturība ar stacionāro fāzi arī atšķiras. Ar vienu un to pašu virzošo spēku katra komponenta aiztures laiks stacionārajā fāzē ir atšķirīgs, tāpēc, ka maisījumā esošie komponenti noteiktā secībā izplūst no kolonnas, sasniedzot atdalīšanu.
Parametrs
Pesticīdu atlieku noteikšana
 |
 |
 |
 |
Mēs to bieži sakāmParastā kolonnu hromatogrāfijafaktiski ir kolonnu hromatogrāfijas atdalīšana, kas pazīstama arī kā kolonnu hromatogrāfija. Pirmoreiz krievu zinātnieki to izmantoja un izmantoja 1903. gadā. Tas saspieda augu pigmentu šķīdumu kalcija karbonāta pulverī un no augšas uz leju atrada dažādas krāsu joslas uz kalcija karbonāta pulvera. Atdalot un ekstrahējot dažādas krāsu joslas, tika iegūts salīdzinoši tīrs hlorofils, luteīns utt.
Pēc simts attīstības gadiem šī metode ir kļuvusi salīdzinoši nobriedusi, un stacionārā fāze ir arī attīstījusies no viena kalcija karbonāta pulvera uz alumīnija oksīdu (kuru var iedalīt skābā, neitrālā, sārmainā), silikagelā, aktivētā ogleklī utt. Starp tām silikozo želeju visbiežāk izmanto galvenajā laboratorijā, parasti sadalot normālu fāzes silīcija gelu un reverso fāzē!
Stacionārā fāze (silikagela) parasti ir jāattīra un jāaktivizē, un daļiņu lielumam jābūt vienveidīgam. Teorētiski, jo mazāks daļiņu izmērs un lielāks virsmas laukums uz masas vienību, jo lielāka ir adsorbcijas spēja un jo labāka atdalīšanas efekts.
Tomēr praktiski lietojot, kad fiksētās fāzes daļiņas ir pārāk mazas, bieži ir divas situācijas: viena ir tā, ka tās ir vieglākas svara un viegli peld gaisā (silikagela nevar noārdīt cilvēka ķermenis, un, jo smalkāks, jo toksiskāks tas ir); Otrkārt, mazas daļiņas var izraisīt arī nelielas spraugas starp daļiņām, kā rezultātā rodas lēns šķīdinātāja plūsmas ātrums un laika patēriņš; Ņemot silikonu kā piemēru, lielākais komerciāli izmantotais silikona izmērs pašlaik ir 200-300 acs.
Runājot par kolonnu nodošanas metodēm, papildus automātiskās analīzes aprīkojumam, piemēram, iepriekšminēto cirkulācijas sagatavošanai, efektīvai šķidruma fāzes sagatavošanai un kolonnu nodošanas mašīnām, manuālā kolonna nodošana galvenokārt tiek sadalīta trīs veidos: atmosfēras spiediena kolonnas nodošana, depresurizācijas kolonnu nodošana un spiediena kolonnas nodošana.
Starp tiem depresurizācija caur kolonnu rada sliktu adsorbcijas efektivitāti, jo strauji plūsmas ātrums ir eluds, kas noved pie lielākā daļa paplāšu skaita un sliktas atdalīšanas efektivitātes. Tas ir piemērots paraugu atdalīšanai ar salīdzinoši atvērtām TLC plāksnēm, īpaši paraugiem ar tikai vienu lielu polāro piemaisījumu izstrādājumā; Lielākā daļa tā laika tiek pavadīts savienojumu pirmapstrādei, pirms rūpīgas attīrīšanas noņemot dažus piemaisījumus. Jāatzīmē, ka šķīdinātāja iztvaikošana, ko lietošanas laikā izraisa negatīvs spiediens, var izraisīt lielu skaitu ūdens pilienu kondensāciju uz kolonnas ārējās virsmas. Ūdens jutīgus savienojumus nevajadzētu viegli mēģināt.
Atmosfēras spiediena kolonnas nodošana ir visefektīvākā atdalīšanas metode starp trim, bet, tā kā šķīdinātājs bieži pārvietojas pārāk lēni, pat vislabākais atdalīšanas efekts var ietekmēt efektivitāti. Tāpēc šajā laikā parasti tiek izdarīts spiediens, ko sauc par spiediena kolonnu, kas iet garām; Bet spiedienam nevajadzētu būt pārāk augstam. Parasti manuālai darbībai tiek izmantota dubultā ķēdes bumba, un automātiskai darbībai tiek izmantots zivju sūknis. Abus var modificēt, kā parādīts attēlā.
Parastais kolonnu šķērsošanas process:
Sagatavošanas darbs jāveic labi:
Izvēloties kolonnu, ievērojiet, vai ir slīpēšanas dēlis. Kolonnām bez slīpēšanas dēļiem atcerieties piepildīt apakšu ar kādu kokvilnu. Kokvilnai nevajadzētu būt pārāk biezai vai pārāk plānai, ja vien tā var bloķēt silikona atkāpšanos. (Emuāru autors tieši demontēja drēbju pakaramo un izmantoja to, lai ievietotu kokvilnu kontaktdakšā)
Sagatavojiet minimālo polaritātes eluentu, UV lukturi (ieteicams laboratorijas personālam, plaukstdatoram, gatavs fotografēt jebkurā laikā), spiediena aprīkojums un testa caurules plaukts pēc nepieciešamības!
Atlasiet piemērotu kolonnu, pievienojiet silikona želeju, iemērciet silikona želeju un saplaciniet to
Atlasītparastā kolonnu hromatogrāfijair ļoti svarīgs, un to lielums jāaprēķina, pamatojoties uz produkta daudzumu, kuru parasti var sadalīt:
Daži miligrami kolonnas (galīgā izvēle kopējai sintēzei);
Vairāku desmitu miligramu kolonna (metodoloģiskā paplašināšanas substrāts);
500 miligrami līdz 1 grami kolonnas (izmantojot metodoloģiju kā izejvielu);
Pīlāri ap 5 g un lielāki mērogi.
Visizplatītākā kolonnu diametra un augstuma attiecība laboratorijā parasti ir no 1: 2,5 līdz 1:15. Silikagela daudzums, ko izmanto kā stacionāru fāzi parauga slodzes laikā, ir aptuveni 20 līdz 40 reizes lielāks nekā paraugā. Kolonnu atlases standartam jābalstās uz jūsu parauga TLC plāksnes kāpšanas situāciju. Ja tiešā tuvumā ir daudz piemaisījumu, mēģiniet pēc iespējas vairāk izvēlēties lielāku kolonnu, lai jūsu paraugu varētu pārklāt ar nelielu plānu slāni (ieteicams biezums zem 5 mm). Ja piemaisījumi ir tālu, šo biezumu var dabiski palielināt, taču nav ieteicams, lai jūsu parauga biezums pārsniegtu 2 cm, ja vien produkts nav vienkārši mazgāts.
Daudzi cilvēki kļūdās, domājot, ka pievienojot vairāk silikona, pat ja tas ir biezāks manā paraugā, vai to var labi atdalīt? Šī atbilde ir negatīva!
Iemesls ir tas, ka šie cilvēki nekad nedomāja, ka zemāk esošie paraugi neskrien uz vienas līnijas, tāpēc viņi varēja iegūt tikai dažus tīrus, no kuriem lielākā daļa tika šķērsoti, nemaz nerunājot par netīriem, tērēt laiku un šķīdinātājus!
Tāpēc arī paraugam nepieciešama retināšana!
Pēc kolonnas izvēles silikona pievienošanu var veikt, izmantojot barošanas piltuvi. Tajā pašā laikā noteikti nēsājiet masku un darbojieties tvaika nosūcējā. Iemesli tam neizsniegs emuāru autors (silikoze).
Runājot par silikagela infiltrāciju, ieteicamais process ir šāds: Vispirms novietojiet silikagela kolonnu ar silikagelu, kas uzstādīts vertikāli, saplaciniet silikagela virsmu ar roku, savienojiet silikagela kolonnas dibenu līdz ūdens sūknim, izsūknējiet silikagelu un pēc tam no augšas ielejiet vismazāko polāro elitu. Kad eluds gatavojas noplūst, aizveriet izslēgšanas vārstu, lai novērstu šķīdinātāja iesūknēšanu ūdens sūknī.
Pēc tam zem spiediena silikona želeju var vienmērīgi samērcēt, izskalojot septiņus vai astoņus kolonnu apjomus ar vismazāko jaunattīstības aģenta daudzumu.
Paraugs virs
Paraugu ņemšana ir sadalīta mitrā paraugu ņemšanā un sausā paraugu ņemšanā.
(1) Mitra paraugu ņemšana.
Ieteicamā metode ir izmantot pipeti ar gumijas galu, lai sūktu paraugu, tuvu silikona želejas augšējai daļai, lēnām un vienmērīgi piliniet paraugu, līdz tā pārklāj slāni, pēc tam pārtrauciet parauga pievienošanu un pieliekiet nelielu spiedienu, lai iegremdētu taukainu vielu silikona želejas slānī; Iegremdējiet taukainu vielu silikona slānī un atkārtojiet šo procesu vairākas reizes, līdz visi paraugi ir ielādēti!
Daži jauni studenti var būt ziņkārīgi, kāpēc šī operācija tiek veikta tā vietā, lai vienlaikus pārklātu mitru procesa eļļu, piemēram, vielu?
Faktiski šī darbība var samazināt parauga slāņa efektīvo augstumu. Šajā brīdī kolonnu hromatogrāfija jau ir sākusies, un sekojošie paraugi ir kā šķīdinātāji, kas stumj iepriekšējos paraugus uz adsorbu un desorbu silikagelā.
(2) Kas attiecas uz sausu paraugu ņemšanu.
Ja vien tas nav absolūti nepieciešams, tas nav ieteicams. Cietos paraugus vairāk ieteicams pārspēt vai kristalizēt. Ieteicams ieteikt negodīgas metodes, etilacetāts pret ūdeni, ultraskaņas svārstības, kas veicina augstas verdošās eļļas kristalizāciju ”un" laboratorijas pārkristalizācijas metodes dalīšana ".
Sausa paraugu ņemšana parasti rada divas problēmas; No vienas puses, parauga sajaukšanas procesa laikā palielinās reakcijas iespēja starp paraugu un silīcija dioksīdu, jo ir nepieciešams paaugstināt temperatūru rotācijas iztvaikošanai; No otras puses, sausa iekraušana nozīmē, ka parauga slānī tiks ievadīti adsorbenti, palielinot parauga slāņa augstumu vai kolonnas lielumu, prasot vairāk laika un vairāk šķīdinātāja.
Ja nav citas izvēles, vienkārši ielejiet adsorbēto pulveri kolonnā iekraušanai, ar dažām prasībām, kas līdzīgas mitrām metodēm.
Pievienojiet bezūdens nātrija sulfātu vai kvarca smiltis
Lai izvairītos no parauga slāņa ietekmes, pievienojot eluentu, izraisot nevienmērīgumu, deformāciju un ietekmējot atdalīšanas efektivitāti, uz parauga slāņa parasti tiek uzlikts bezūdens nātrija sulfāta vai kvarca smilšu slānis.
Mūsu inženieri personīgi dod priekšroku bezūdens nātrija sulfāta nolikšanai, jo tam ir arī žāvēšanas funkcija un tas ir draudzīgs šķīdinātājiem, piemēram, dihlormetānam, kuriem ir tendence uz iztvaikošanu, siltuma absorbciju un kondensāciju!
Gradienta eluēšana, paraugu ņemšana un savākšana
Pēc iekraušanas vispirms noskalojiet kolonnu ar nelielu polāro šķīdinātāju (šķīdinātāju, kas neļaus produktam iziet cauri) 2-3 kolonnu tilpumiem (viena kolonnas tilpums tiek definēts kā mobilās fāzes tilpums, kas plūst un ārā), lai nodrošinātu vienveidību un pēc tam atlasiet proporciju eluēšanai.
Kā izvēlēties elužu, kas iet cauri kolonnai?
ELUED attiecība ir attiecība, kad jūsu produkts sasniedz RF vērtību aptuveni 0. 2 uz TLC plāksnes
Šī ir kolonnu mazgāšanas pieredze, kurā esmu lasījis daudzas grāmatas un dalījusies, un arī faktiskais process ir ļoti līdzīgs. Personīgi es labprātāk samazinu gradientu par divreiz.
Piemēram, ja TLC plāksnes kāpšanas šķīdinātājs ir PE/EA =2: 1, emuāru autors, visticamāk, sāk gradienta eluāciju no PE/ea =4: 1 un beidzas ar PE/EA =2: 1, parasti rezultāts ir labāki rezultāti.
Savācot eluentu, ir arī paņēmieni. Vispirms varat izvēlēties lielāku testa cauruli, lai to saņemtu, un, kad TLC tuvojas mērķa punktam, pārslēdzieties uz mazāku testa mēģeni. Tas var samazināt iespēju saņemt vairāk un izvairīties no piemaisījumiem.
Ja rodas situācijas, kad piemaisījumu punkti un produkta punkti ir tuvu viens otram, it īpaši tie, kuriem ir vāja fluorescence, atcerieties nepiemērot spiedienu. Tā vietā izvēlieties nokārtot kolonnu ar normālu spiedienu un nomainiet mēģeni katru reizi, kad ir pievienotas pusi vai mazāk caurules, kas var arī palielināt attīrīšanas varbūtību.
Atcerieties savlaicīgi netikt galā ar stabu!
Daudziem cilvēkiem ir ieradums pieņemt, ka kolonna ir nodota un žāvēta, ja vēlākā posmā vienā vai divās mēģenēs nav produkta.
Es tikai sapratu, ka raža ir pārāk zema, kad to aprēķināju, vai kad es devos izgatavot spektru, es atklāju, ka spektrs ir nepareizs un nokavējis nepareizo punktu. Es to dziļi nožēloju.
Tāpēc pēc vēlamā punkta pabeigšanas ieteicams steigties apstrādāt kolonnu. Tā vietā veiciet kodolmagnētisko rezonansi, lai tie atbilstu ražai pirms apstrādes.
Ja esat aizņemts vai steidzaties attīrīt citus savienojumus ar toparastā kolonnu hromatogrāfija, ieteicams izskalot ar augstu polaritātes labdabīgu jauktu šķīdinātāju un atstāt šo eluenta daļu atsevišķi identifikācijas rezultātiem.
Populāri tagi: Parastā kolonnu hromatogrāfija, Ķīna parasto kolonnu hromatogrāfijas ražotāji, piegādātāji, rūpnīca
Nosūtīt pieprasījumu
